微生物限度儀是藥品、化妝品、純化水、食品原料微生物限度檢查的專用設(shè)備，以薄膜過濾法為核心，相比平皿涂布法，適合低菌量、大體積樣品檢測，廣泛用于制藥潔凈實(shí)驗(yàn)室。依靠濾膜截留微生物，后續(xù)培養(yǎng)基培養(yǎng)計(jì)數(shù)，判斷樣品微生物污染水平，微生物限度儀由濾頭支架、真空泵/負(fù)壓泵、濾杯、廢液收集、控制單元組成。
 

　　1、薄膜過濾基礎(chǔ)原理。利用一定孔徑的無菌濾膜作為截留介質(zhì)，常用0.45μm混合纖維素濾膜，液體樣品在負(fù)壓抽吸作用下勻速通過濾膜。樣品里的細(xì)菌、酵母菌、霉菌等微生物粒徑大于濾膜孔徑，被截留在濾膜表面；溶液、可溶性基質(zhì)透過濾膜流入廢液瓶。過濾完成后，將載有微生物的濾膜貼放至固體培養(yǎng)基上，在適宜溫度下恒溫培養(yǎng)，截留的微生物增殖形成肉眼可見菌落，通過菌落數(shù)量計(jì)算樣品微生物限度。對(duì)于抑菌性樣品，過濾同時(shí)可使用沖洗液沖洗濾膜，消除樣品抑菌成分，避免抑制微生物生長造成假陰性。
 

　　2、試驗(yàn)前期準(zhǔn)備工作。提前對(duì)濾杯、濾頭、管路、濾膜進(jìn)行滅菌處理，整套接觸樣品的組件保持無菌狀態(tài)。準(zhǔn)備配套稀釋液、沖洗液、選擇性培養(yǎng)基，核查培養(yǎng)基有效期。確認(rèn)負(fù)壓系統(tǒng)、廢液瓶完好，管路無滲漏。在無菌環(huán)境(生物安全柜/超凈臺(tái))內(nèi)組裝濾膜，濾膜平整放置，無褶皺、破損，濾杯密封到位，防止樣品從側(cè)邊滲漏，造成漏菌。同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照，驗(yàn)證環(huán)境、耗材、操作不存在污染。
 

　　3、薄膜過濾檢測實(shí)施流程。將待測樣品加入濾杯，啟動(dòng)負(fù)壓抽吸，控制合適抽濾速度，流速過快容易擊穿濾膜、菌體穿透，流速過慢延長過濾時(shí)間、增加污染風(fēng)險(xiǎn)。樣品過濾完畢，加入無菌沖洗液沖洗濾膜，洗脫濾膜上殘留的抑菌物質(zhì)，沖洗液按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定量分次加注、抽濾。過濾結(jié)束后，關(guān)閉負(fù)壓，小心取出濾膜，保持截留菌面朝上，平鋪貼附在培養(yǎng)基平板表面，避免產(chǎn)生氣泡。做好樣品編號(hào)標(biāo)記，放入恒溫培養(yǎng)箱，按菌種要求設(shè)置培養(yǎng)溫度與時(shí)長。
 

　　4、菌落判讀、記錄與微生物限度儀后處理。培養(yǎng)周期結(jié)束后取出平板，人工或者菌落計(jì)數(shù)器讀取菌落數(shù)，結(jié)合樣品取樣體積換算樣品中的微生物限度，同步對(duì)比陰性對(duì)照結(jié)果。陰性對(duì)照長菌，則整批試驗(yàn)結(jié)果無效，判定試驗(yàn)污染，需要重新檢測。試驗(yàn)結(jié)束后，排空廢液，拆卸濾杯，清洗整套過濾組件，滅菌備用；負(fù)壓管路定期消殺，防止生物膜滋生造成交叉污染。廢液按照生物廢棄物規(guī)范處理。
 

　　總結(jié)
 

　　微生物限度儀依托負(fù)壓驅(qū)動(dòng)的薄膜截留原理，把液體樣品中的微生物截留在濾膜表面，經(jīng)培養(yǎng)后計(jì)數(shù)。完整流程包含無菌組裝、樣品抽濾、沖洗去抑菌、濾膜轉(zhuǎn)移鋪板、恒溫培養(yǎng)、菌落計(jì)數(shù)。濾膜破損、流速失控、抑菌成分未沖洗干凈、操作引入雜菌，是產(chǎn)生假陽性、假陰性的主要原因。嚴(yán)格控制無菌操作、規(guī)范沖洗步驟、設(shè)置對(duì)照試驗(yàn)，能夠保障微生物限度檢測數(shù)據(jù)真實(shí)可靠，滿足藥典相關(guān)檢驗(yàn)規(guī)范。